SHuffle T7 E. coli感受态细胞

SHuffleT7E.coli：100μl/支  
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl  
保存条件(保质期)：-80℃（6个月）  
基因型  
F´lac,pro,lacIq/Δ(ara-leu)7697araD13fhuA2lacZ::T7gene1Δ(phoA)PvullphoRahpC*galE(orU)galKλatt::pNEB3-r1-cDsbC(SpecR,laclq)ΔtrxBrpsL150(StrR)ΔgorΔ(malF)3  
产品说明  
SHuffleT7E.coli菌株是K12的衍生菌株。该菌株的染色体中整合了一个拷贝的二硫键异构酶DsbC基因，可以促进含有二硫键蛋白的正确折叠；此外DsbC还是一个分子伴侣，可以帮助不含二硫键蛋白正确折叠，形成正确构象，同时该菌株可降低目的基因的本底表达，适合于毒性基因的原核表达。SHuffleT7E.coli菌株染色体中整合了一个拷贝的T7RNA聚合酶基因，可以表达噬菌体T7RNA聚合酶，适合于T7启动子诱导的蛋白表达；该菌株还可以表达大肠杆菌RNA聚合酶，所以可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。SHuffleT7E.coli菌株具有抗T1噬菌体感染的特点，具有链霉素，壮观霉素抗性。SHuffleT7E.coli感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达108cfu/μgDNA。  
操作方法  
1.SHuffleT7E.coli感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。  
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。  
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的LB无菌培养液，37℃，200rpm复苏60分钟。  
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取50μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。  
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。  
IPTG配制：  
Preparea1MsolutionofIPTG(Isopropyl-β-D-thiogalactoside;Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)  
bydissolving2.38gofIPTGinddwaterandadjustthefinalvolumeto10ml.Filtersterilizebeforeuse.  
注意事项  
1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。  
2.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。  
3.诱导时，IPTG浓度可选（0.1-10mM均可）。  
4.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。  
5.SHuffleT7E.coli菌株具有链霉素，壮观霉素抗性，不可用于具有链霉素，壮观霉素抗性质粒的转化。