GV3101(pJIC SA_Rep)电击感受态细胞 ,根癌农杆菌电击感受态

GV3101 (pJIC SA_Rep) Elec：                                      50μl/支
pGs2（control vector，10ng/μl )                                     10μl
保存条件(保质期)：                                          -80℃（12个月） 
基因型
C58 (rif^R) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gent^R) Nopaline(pJIC SA_Rep -tet^R)
产品说明
GV3101(pJIC SA_Rep)菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 质粒含有筛选标签：gent，赋予GV3101菌株庆大霉素抗性；在GV3101菌株中转入help质粒：pJIC SA_Rep即为GV3101(pJIC SA_Rep)菌株，可帮助pgR106，pgR107，pGreen，pGs2系列质粒在农杆菌中复制，同时赋予该菌株四环素（tet）抗性，适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。本公司的GV3101(pJIC SA_Rep)电转感受态特别适用于大质粒的转化：经pGs2(卡那霉素抗性)质粒检测转化效率>10⁶ cfu/μg。
 
操作方法
1. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入0.01-1 μg质粒DNA（体积不大于6ul，感受态转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。
3. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数为Biorad 推荐，使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中，加入700 μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中，28℃振荡培养2~3小时。
4. 6000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天

       （当平板只含有50 μg/ml kan 时，28℃培养48 h即可；平板中同时加入50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 时，需28℃培     养60 h；如果使用的平板含有50 μg/ml rif 则需要28℃培养72-90 h）。