酵母基因组DNA抽取试剂盒 ,50T

试剂盒组成 组分 50 次 100 次 Buffer Digestion 24 ml 48 ml Buffer PY 12 ml 24 ml TE Buffer (pH 8.0) 10 ml 20 ml Snailase Reaction Buffer 60 ml 120 ml Snailase Storage Buffer 5 ml 10 ml Snailase 600 mg 1200 mg 操作手册 1 份 1 份 保

存方法及注意事项 本试剂盒于常温运输，Snailase 请于-20°C 保存，其它组分室温保存，有效期见包装。
Buffer Digestion 中含有刺激性化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止 吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
产品介绍 本试剂盒无需使用苯酚、氯仿等有毒试剂。
从 2 ml 酵母菌液可以获得 5~10 µg DNA，OD260/OD280 比值一般为 1.7~1.9 之间。抽提出的 DNA 可用于酶切、PCR、文库构建、Southern blot 等相关实验。
标准抽提步骤 自备材料：水浴锅、小型高速离心机（最大离心力 ≥ 12,000 × g）、1.5 ml 离心管、75%乙醇、异丙醇、β-巯基乙醇等。
Buffer Digestion 在低温下可能产生沉淀，使用前请检查，如有沉淀，请于 65°C 溶解沉淀后使用。
Snailase 比较难溶解，请提前将 Snailase 加入 Snailase Storage Buffer，涡旋混匀使酶溶解，如溶解不完全，可以将 Snailase 置于冰箱 4 °C 过夜溶解。待完全溶解后分装，-20°C 冰箱保存备用。
提前将水浴锅调至 65°C 备用。
1. 细胞和细胞核的裂解：取1~2 ml过夜培养的酵母菌液，加入1.5 ml离心管中，室温10,000 rpm离心1 min，弃上清，收 集菌体。 ü 1 ml 过夜培养的酵母培养物离心收集，湿重约为 20 mg。
2. 酵母细胞壁的去除：按每20 mg菌体湿重取600 µl Snailase Reaction Buffer加入步骤1中的离心管，同时加入2.4 µl β-巯 基乙醇和50 µl实验前准备好的Snailase，37°C水浴3 h。室温10,000 rpm离心2 min，弃上清。 ü 酵母细胞壁结构坚韧，若想破壁完全，可以增加 Snailase 的用量或延长破壁时间，可以 37°C 水浴过夜。
3. 加入400 µl Digestion Buffer，震荡混匀。65°C水浴1 h至细胞完全裂解。 ü水浴过程中，每 10 min 颠倒混匀一次，可促进样品裂解。 如需得到无 RNA 的 DNA，可在水浴后加入 20 µl 的 RNase A（10 mg/ml），室温放置 2~5 min。
4. 加入200 µl Buffer PY，充分颠倒混匀，-20°C冰箱放置5 min。
5. 室温10,000 rpm离心5 min，将上清液（约500~550 µl）转移到新的1.5 ml离心管中。 若上清液混浊，可再加入等体积氯仿混匀，12,000 rpm 离心取上清。
6. 加入等体积的异丙醇，颠倒5~8次使之混匀，室温放置2~3 min。室温10,000 rpm离心5 min，弃上清。
7. 加入1 ml 75%乙醇，颠倒漂洗1~3 min，10,000 rpm离心2 min，弃上清。 ü 漂洗时一定要使沉淀悬浮起来。
8. 重复步骤7一次。
9. 开盖室温倒置5~10 min至残留的乙醇完全挥发。  此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响后续实验。  如果残留的乙醇有挂壁现象，倒掉液体后再短暂离心，将残液用移液器吸出。然后开盖室温放置 5~10min 至残留的乙 醇完全挥发。
10. 得到的DNA用50~100 µl TE Buffer溶解。提取的DNA可立即进行下一步实验或-20°C保存。 TE Buffer 为 10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA, pH 8.0