产品简介
DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下,二硝基水杨酸(DNS)与还原糖发生氧化还原反应,生成3-氨基-5-硝基水杨酸,该产物在煮沸条件下显棕红色,且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理,用比色法测定还原糖含量的。因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关,而对还原糖的种类没有选择性,故DNS方法适合用在多糖(如纤维素、半纤维素和淀粉等)水解产生的多种还原糖体系中。
操作步骤(仅供参考):
1、 还原糖的提取:
2、 总糖的水解和提取:
3、 制作葡萄糖标准曲线:取干净离心管或试管,按下表进行操作,以0号调零,检测540nm处吸光度,以吸光度值为纵坐标,各标准浓度(mg/ml)为横坐标作图得标准曲线。
加入物质(ml) | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
Glu标准(1mg/ml) | 0 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1 |
蒸馏水 | 1 | 0.8 | 0.6 | 0.4 | 0.2 | 0 |
DNS试剂 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 |
沸水浴中5分钟后取出,流水冷却至室温 | ||||||
蒸馏水 | 9 | 9 | 9 | 9 | 9 | 9 |
相当于葡萄糖量 | 0 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1 |
4、还原糖测定:取制备好的还原糖提取液或者总糖水解液1ml,分别加入DNS试剂2ml,其余操作同标准曲线的操作,540nm处测定各管的吸光度。
计算:
还原糖的百分含量:
还原糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100
总糖的百分含量:
总糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100×10×0.9
注意事项:
1、 上述低温试剂避免反复冻融,以免失效或效率下降。
2、 待测样本如不能及时测定,应置于2~8℃保存,3天内稳定。
3、 如果样品还原糖浓度过高,应用蒸馏水稀释后重测,结果乘以稀释倍数。
4、 总糖计算公式在测定干扰杂质很少、还原糖含量相对总糖含量很少时使用,×0.9是为了从测定出的总糖水解成单糖中,扣除水解时所消耗的水量。
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DNS显色剂