概述
该限制性内切酶识别5'-C↑TCGAG-3'的酶切位点,并在W缓冲液中具有最佳活性。
特点
- 所有酶都适用于通用的Single Buffer缓冲液,可在统一反应体系内任意组合,无需多次单酶切或更换酶切缓冲液,方便、稳定、快速、可精准切割载体。
应用
分子克隆等
使用说明
高酶浓度和非最佳缓冲液的使用可能导致星活性, 使用BSA时不要长时间孵育。 为了获得更高的活性,应将BSA加入到1X 反应混合物中至最终浓度为100 μg/ ml。
组分
2 KU/管XhoI,10X Buffer W,10X Single buffer
属性
识别位点 | 5'-C↑TCGAG-3' |
来源 | 携带来自黄单胞菌的xhoIR克隆基因的重组大肠杆菌 |
最适缓冲液 | 10X buffer W(100 mM Tris-HCl(pH 8.5),100 mM MgCl2,1000 mM KCl,1 mg/mL BSA) |
通用缓冲液 | 10X Single buffer |
孵育 | 37°C |
酶活定义 | 1U酶是在1 h,37°C,总反应体积为50 μl 时水解1 μg λDNA所需的酶 |
储存 | -20°C |
储存条件 | 10 mM Tris-HCl(pH 7.4,25°C),100 mM KCl,1 mM DTT,1 mM EDTA,0.2 mg/mL BSA,0.15% Triton X-100,50%甘油 |
连接与重切 | 使用 10 倍酶量消化底物,回收酶切产物。在 22°C 下使用适量 T4 DNA 连接酶可以将超过 95%的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开超过 95%的连接产物 |
甲基化影响 | dam甲基化不敏感,dcm甲基化不敏感,CpG甲基化敏感 |
热失活 | 在80°C加热20分钟失去活性 |
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限制性内切酶XhoI