琼脂糖凝胶电泳试剂盒 ,试剂盒

别名:
Cas号: 物化性质:
分子式: 熔点:
分子量: 沸点:
EINECS编号: 密度:
MDL号: 储存条件:

本试剂盒适用于琼脂糖凝胶DNA的纯化回收。在高离序盐存在的情况下,DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。
  • 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
  • 使用了优质溶胶液,不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
  • 溶胶液调制成为了黄颜色,便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到最佳结合效果,大大提高回收效率。
  • 改进的溶胶液配方,大大提高了缓冲能力和稳定性,即使样品变化很大也能将pH缓冲在最佳结合范围内。
  • 快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。
  • 在长波紫外灯下,用干净刀片将所需回收的DNA条带切下,尽量切除不含DNA的凝胶,得到凝胶体积越小越好。
  • 将切下的含有DNA条带凝胶放入1.5mL离心管,称重。
    先称一个空1.5mL离心管重量,然后放入凝胶块后再称一次,两次重量相减,得到凝胶的重量。
  • 加3倍体积溶胶液DD。
    如果凝胶重为100mg,其体积可视为100μL,则加入300μL溶胶液。
    如果凝胶浓度大于2%,应加入6倍体积溶胶液。
  • 56℃水浴放置10分钟(或直至胶完全溶解)。每2~3分钟涡旋震荡一次帮助加速溶解。
  • 可选,一般不需要:每100mg最初的凝胶重量加入150μL的异丙醇,震荡混匀。
    有时候加入异丙醇可以提高回收率,加入后不要离心。回收大于4Kb的片段时,不加入异丙醇,加入有时反而可能降低回收效率。
  • 将上一步所得溶液加入吸附柱EC中(吸附柱放入收集管中),室温放置1分钟,12000rpm离心30~60秒,倒掉收集管中的废液。
    使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤,具体方法参见附录参考“关于平衡液的使用”。
    如果总体积超过750μL,可分两次将溶液加入同一个吸附柱EC中。
    过滤下的溶胶液和收集管内残存的强碱性平衡液混合后,溶胶液可能会从黄色变成橘红甚至紫色,此为酚红pH指示剂碱性条件下的正常颜色变化。
  • 加入600μL漂洗液WB (请先检查是否已加入无水乙醇!),12000rpm离心30秒,弃掉废液。
  • 加入600μL漂洗液WB,12000rpm离心30秒,弃掉废液。
  • 将吸附柱EC放回空收集管中,12000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
  • 取出吸附柱EC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加50μL洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65~70℃水浴中加热效果更好),室温放置2分钟,12000rpm离心1分钟。如果需要较多量DNA,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,离心1分钟。
    洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于25μL,体积过小降低DNA洗脱效率,减少产量。
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琼脂糖凝胶电泳试剂盒